Elä ja hengitä Ezion, legendaarisen mestariassassiinin, roolissa hänen jatkuvassa taistelussaan mahtavaa temppeliritarikuntaa vastaan. Hänen on matkustettava Italian suurimpaan kaupunkiin, Roomaan, vallan, ahneuden ja korruption keskukseen iskeäkseen vihollisen sydämeen. Siellä vallitsevien korruptoituneiden tyrannien kukistaminen vaatii paitsi voimaa myös johtajuutta, sillä Ezio komentaa kokonaista veljeskuntaa, joka liittoutuu hänen puolelleen. Vain yhdessä työskentelemällä assassiinit voivat voittaa kuolevaiset vihollisensa ja estää veljeskuntansa tuhon. Ensimmäistä kertaa pelissä esitellään ennennäkemätön moninpelikerros, jonka avulla voit valita monenlaisista assassiinihahmoista, joista jokaisella on omat ainutlaatuiset aseensa ja salamurhatekniikkansa, ja mitata taitosi muita assassiinihahmoja vastaan ympäri maailmaa. On aika liittyä veljeskuntaan.